一般的なバッファ塩のカテゴリ

逆相クロマトグラフィーでは、移動相のpHは一般に2〜7である。 分析物が逆相条件下で解離することができる場合、またはサンプルのpHが2〜7の範囲外である場合、aバッファ塩が必要です。 逆相条件下で解離することができる化合物は、一般に、1〜11のpKa値を有するアミノ基およびカルボキシル基を有する。 正しいバッファーpHを選択すると、解離した官能基がイオン型または中性化合物型のいずれかで存在することを保証できます。 サンプルのpHがカラムに有害である場合、緩衝液はそれをより穏やかにするか、または害を減らすことができます。 従来のシリカベースのカラムのpH許容範囲は2〜8である。 一般的な緩衝電解質塩は次のように分類されます。

1.アルカリバッファ塩

一般的な添加剤にはアンモニアとトリエチルアミンが含まれ、どちらも水のpHを非常に高いレベルまで上昇させることができ、シリカゲル粒子を溶解するのに十分な高さになります。 したがって、それらは慎重に使用する必要があります。 さらに、これらの2つの溶媒は、通常、洗浄および保守方法によって容易に除去されない。 特にトリエチルアミンについては、クロマトグラフィー純度であっても、長期間保存した後に劣化により汚染される可能性がある。

2.酸性バッファ塩

1.ギ酸: 通常1% 以下の濃度で使用され、水のpHを約2に上げることができます。

2.酢酸: ギ酸よりわずかに酸性度が低く、通常5% を超えない濃度で使用され、水のpHを約2に上げることができます。

3.トリフルオロ酢酸: 比較的強い酸、通常0.5% を超えない濃度で使用され、水のpHを2未満に下げることができます。大きなイオン強度と特定のイオン対効果があり、タンパク質やペプチドを分析する際の添加剤としてよく使用されます。 これらの3つの酸の最も致命的な問題は、低波長でのUV吸収にあります。 通常、215nm未満の波長で使用することは推奨されません。 さらに、ギ酸、酢酸、およびトリフルオロ酢酸は揮発性であり、これらの濃度緩衝電解質塩時間とともに変わるかもしれません。

4.リン酸: これは、イオン強度の良い非揮発性酸です。 最も重要なことは、低波长UVエリアにバックグラウンド吸収がないことです。 しかし、質量分析法に適合しないなど、いくつかの欠点もあります。 さらに、硫酸、塩酸、クエン酸などの他の酸もありますが、まれです。

3.塩バッファ塩

異なる2つの塩の割合を調整することにより、単純な酸塩基バッファーと比較してバッファ塩、特定のpHを有する緩衝液を容易に準備することができ、緩衝能力を有する緩衝塩は、移動相のpH値を制御することができる。

1.ギ酸塩: 液体クロマトグラフィーで一般的に使用されるギ酸塩はギ酸アンモニウムです。 このタイプの塩は溶解性が高く、液体質量分析法と完全に互換性があり、クロマトグラフィーカラムへの影響は比較的小さいです。 しかしながら、その欠点は、イオン強度が相対的に低いことである。 さらに、ギ酸塩は潮解しやすいため、計量が困難になり、移動相で揮発性が生じる可能性があります。 ギ酸と組み合わせると、ギ酸-ギ酸アンモニウム緩衝システムは、2つの比率を調整するだけで、3〜4.5のpH範囲内で緩衝能力を達成できます。

2.酢酸塩: 一般的な例は酢酸アンモニウムである。 酢酸塩の使用はギ酸塩に似ており、イオン強度は高くありません。 酢酸 − 酢酸アンモニウム緩衝系は、4〜5.5の範囲でpHを制御することができる。

3.リン酸塩: 220 nm未満の波長で使用できるため、UV検出条件下でHPLCで最も一般的に使用される緩衝液の1つ。 リン酸塩は3つのpKa値を有する。 それらは広く使用されていますが、高濃度条件下でHPLCポンプまたはクロマトグラフィーカラムで沈殿するのを防ぐために、溶解性の問題に注意を払う必要があります。

リン酸のナトリウム塩とカリウム塩が一般的に使用されており、2つのpH制御能力は非常に似ており、イオン強度にわずかな違いがあります。 ほとんどの場合、それらは同じ意味で使用できます。 リン酸は多塩基酸であるため、リン酸一水素とリン酸二水素を形成することができ、したがって、pHを調整するためのリン酸緩衝システムの使用は、より柔軟であり、広範囲をカバーでき、高いイオン強度を提供できます。 残念ながら、移動相のリン酸緩衝システムは互換性がありませんレマススペクトロメトリー。